外泌體(Exosome)是由不同細胞分泌的直徑 30-150nm 的胞外膜性囊泡。外泌體內容物豐富,包括蛋白質、脂質和核酸等,在細胞間信息交流中發揮著重要作用,并與多種疾病的發生、發展、治療及預后密切相關。
作為天然的胞間信息載體,外泌體免疫原性低,生物相容性高,在人體血液中比較穩定。能夠利用增強滲透滯留效應(Enhanced Permeation and Retention effect,EPR),有選擇性的滲透和滯留在腫瘤或炎癥組織部位,可穿透血腦屏障等。不僅可以通過其內源內容物直接對受體細胞進行治療,也可以作為藥物載體,遞送化學藥物、蛋白質、多肽及基因藥物,在醫療領域具有巨大的應用潛力。
為了增強外泌體的治療效果,降低對正常細胞的毒害,需提高外泌體的靶向遞送能力,目前科研常用方法是基因改造分泌外泌體的細胞,利用重組克隆質粒,在細胞中表達靶向蛋白或多肽-外泌體膜蛋白復合體,收集釋放的外泌體,來獲得靶向外泌體,但該方法修飾效率低,且部分細胞轉染困難,難以大規模制備。
本試劑盒避開繁瑣的基因克隆步驟,通過點擊化學反應,直接在提取的外泌體表面修飾目標蛋白。首先將點擊化學 linker A 分子共價偶聯在外泌體表面,形成 exo-linker A,點擊化學 linker B 分子與靶向蛋白共價偶聯,形成 pro-linkerB,各自純化,去除剩余的 linker 分子。然后將 exo-linker A 和 pro-linker B 孵育,兩個 linker 之間發生快速高效的點擊化學反應,以共價鍵形式將目標蛋白偶聯在外泌體表面,最后采用 SEC 分子排阻柱將剩余的 pro-linker B去除,得到大量純凈的修飾外泌體。
本試劑盒表面修飾效率高,反應條件溫和,生理條件下即可發生反應,反應特異性好,無有害副產物,不需額外添加催化劑或其他化學物質,不會損傷外泌體膜結構,也不影響目標蛋白的生物活性和功能,為靶向外泌體提供了一種高效、簡便的修飾手段,可實現靶向外泌體的大規模制備。