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外泌體粉末化服務
外泌體(exosome),是指直徑在40-150nm的盤狀囊泡。外泌體內部包裹了蛋白質、mRNA和microRNA等物質,目前基于質譜的蛋白質組學是研究外泌體不可或缺的一項技術。
本實驗室采用Thermo Scientific Q Exactive plus 組合型四吸桿orbitrap質譜儀進行外泌體蛋白質質譜檢測。根據客戶需求本公司可提供不同的檢測方法:
一種是非標定量法(Label-Free),該方法是近年來重要的蛋白定量方法,該技術無需昂貴的同位素標簽做內標,提高了低豐度蛋白質的檢測效率和蛋白質定量的準確性。非標定量法是通過比較質譜分析次數或質譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數量變化,認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關,因此蛋白質被質譜檢測的計數反映了蛋白質的豐度,通過適當的數學公式可以將質譜檢測計數與蛋白質的量聯系起來,從而對蛋白質進行定量。
另一種是標記定量法(iTRAQ/TMT),iTRAQ/TMT試劑由三部分組成:報告基團、平衡基團和反應基團。反應基團形成2-10種等質量同位素標簽。iTRAQ/TMT試劑標記酶解后的肽段,可與氨基酸N端及側鏈的伯胺基團發生反應。在一級譜圖中,來自于不同樣本的同一肽段,標記后表現為相同的質荷比。在二級譜圖中,報告基團、平衡基團和反應基團之間的鍵斷裂,帶不同同位素標簽的同一肽段產生質量不同的報告離子,根據報告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息,再經過軟件處理得到蛋白質的定量信息。
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